| 저자(한글) |
ZHAO, Xin-yu,WANG, Wei-xi,LU, Ze-lan,HUANG, Lei,ZHAO, Ke-wen |
| 초록 |
KLF5의 상호작용 단백질을 연구하기 위하여 그 생물 기능을 심층적으로 탐색하고 FLAG, HA, 6xHis 3쌍 태그를 지닌 C말단의 pOZ-KLF5 진핵 발현 역전사 바이러스 벡터를 구축하였다. pOZ-KLF5 벡터는 한번의 전사를 통하여 bicistronic 전사 단위를 얻을 수 있으며, 즉 1개 전사물질은 2가지 독립적으로 존재하는 단백질[3쌍 태그 융합단백질 KLF5-3xTag와 선별 마커--인터류킨-2수용체α(IL-2Rα)]을 발현할 수 있다. IL-2Rα 결합 항체의 자성비드( magnetic beads )를 통하여 KLF5-3xTag를 양성 발현하는 293T 세포를 성공적으로 선별하였으며, Western-blot으로 세포내 KLF5-3xTag 발현 정황 및 그 293T 세포 증식과 주기에 미치는 영향을 검출하였다. 결과, KLF5-3xTag는 세포 클론의 형성을 촉진할 수 있고 S기 세포를 증가시키며, 이미 알려진 E3 유비퀴틴연결효소(ubiquitin ligase) WWP1에 의해 분해되었다. 기존의 보고와 일치하였다. 심도있는 면역 침전 실험을 통하여 KLF5와 융합된 태그의 면역 반응성을 증명하였다. 해당 플라스미드의 성공적 구축은 KLF5 상호작용 단백질을 연구하고 그 생물 기능을 깊이 탐색하는데 기초를 마련하였다. |
