| 초록 |
본 발명은 아퀴펙스 파이로필러스 ( Aquifex pyrophilus )로부터 분리된 내열성 DNA 중합효소 (thermostable DNA polymerase)의 유전자 및 그로부터 유추되는 아미노산 서열에 관한 것이다. 본 발명자들은 아퀴펙스 애오리커스 ( Aquifex aeolicus )의 DNA 중합효소 유전자를 탐침자로 사용하여 아퀴펙스 파이로필러스의 게노믹 DNA로부터 내열성 DNA 중합효소 ( Aquifex pyrophilus DNA polymerase, Apy DNA polymerase) 유전자를 포함하는 절편들을 선별하였다. 전기 절편들을 대장균에 클로닝하여 콜로니 하이브리다이제이션 방법으로 Apy DNA 중합효소 유전자 절편을 포함하는 양성 클론들을 선별한 다음, 양성으로 판명된 클론들로부터 Apy DNA 중합효소 유전자 절편을 분리하여 전기 양성 클론들이 Apy DNA 중합효소 유전자 절편을 포함하고 있음을 재확인하였다. 이어서, Apy DNA 중합효소 유전자 절편들의 염기서열을 결정하고, 전기 염기서열로부터 아미노산 서열을 유추하였는데, Apy DNA 중합효소 유전자는 종지코돈을 포함하여 1725 bp로 이루어져 있고, 574개의 아미노산으로 구성된 단백질을 암호화하고 있는 것으로 확인되었다. Apy DNA 중합효소의 아미노산 서열을 종래의 내열성 DNA 중합효소들 및 대장균 DNA 중합효소I의 아미노산 서열과 비교분석한 결과, 본 발명의 Apy DNA 중합효소는 종래의 DNA 중합효소들과 높은 서열 상동성을 가지는 새로운 내열성 DNA 중합효소임이 확인되었으며, DNA 중합 활성 (DNA polymerization activity)과 함께 DNA 중합시에 정확도를 높여주는 교정 활성 (proof-reading activity)도 가지고 있을 것으로 추정되었다. 본 발명의 Apy DNA 중합효소 유전자는 내열성 DNA 중합효소를 산업적으로 대량생산하거나, 유전자 조작을 통한 단백질공학적 방법을 이용하여 원래의 효소에 비하여 보다 기능이 향상된 고효율·고기능성의 재조합 내열성 DNA 중합효소를 생산하는데 유용하게 사용될 수 있을 것이다. |
