| 초록 |
청정 미나리를 시설 내에서 년중 생산하려면 균일하고 소질이 우수한 묘를 계절에 관계없이 년중 대량으로 공급할 수 있는 경제적이고 능률적인 번식방법의 개발이 선행되어야 한다. 기존의 미나리 번식방법인 영양번식법은 많은 노력이 필요하고 계절적인 제한을 받으며 균일한 묘를 얻기도 힘든 단점을 가지고 있다. 따라서 그 동안 종자를 통한 번식방법을 시도하여 종자의 발아를 억제하는 원인을 구명하고 제거하는 기술을 개발하였다. 본 발명은 미나리 묘의 효율적이고 경제적인 공급방법을 개발하기 위하여 실용화가 가능하다면 최상의 번식방법이라고 세계적으로 인정되고 있는 '체세포배를 이용한 대량증식 방법'으로서, 미나리 묘를 단기간에 대량, 연속 생산할 수 있는 기술이다. 이 기술은 본 특허신청자 외에는 미나리에 있어서는 시도된 바가 없으며 당근, 셀러리 등 다른 몇 가지 작물에서 이 방법을 실용화하기 위해 연구가 많이 되어 왔으나 아직 실용화에는 해결해야할 문제가 남아 있다. 본 발명은 미나리의 조직을 적정한 영양과 식물생장조절물질이 함유된 배지에 치상한 뒤 적정한 환경에서 배양하면 세포의 덩어리(캘러스;callus)가 생기는데, 여기서 생긴 세포의 덩어리에서 체세포배라는 수분에 의해 화분과 난세포가 결합된 종자의 배와는 다른 체세포배가 무수하게 형성되고, 이것은 일정한 조건에서 발아되어 조직을 떼어낸 식물체와 똑같은 식물체가 되는 현상을 이용한 것이다. 본 발명은 미나리에 있어서 체세포배를 유기하여 완전한 식물체를 얻는 방법과 이앙기를 이용한 미나리 실생묘 정식의 전반에 걸친 사항이다. 본 발명의 구체적인 내용은 체세포배가 발생과 발생하기 전 단계인 embryogenic callus의 형성에 효율적인 식물체 조직 및 배지의 조성, callus를 생물반응기에서 대량 생산하는 방법, embryogenic callus로부터 체세포배를 유기하는 배지의 조성, 체세포배의 균일화를 위한 생장조절제 조성, 체세포배의 발생효율을 높이기 위한 액체배양방법, 생물반응기(bioreactor)내에서의 체세포배 발생, 체세포배의 발아, 순화 및 육묘 조건 등이다. 또한 수도용 이앙기에 엽채류인 미나리를 적용하기 위해 기계 이앙에 적합한 육묘 배지 구명, 파종 밀도 및 묘 밀도, 적정 초장, 묘령 및 줄기 강도 등과 육묘 기간 동안의 시비와 물리적 자극, 이앙시의 포장 조건, 재식 간격 등이다. 체세포배를 얻기 위해서는 먼저 embryogenic callus를 유기해야 하는데 미나리에서 유기되는 embryogenic callus는 유백색을 띠고 미숙소화로부터 가장 잘 유기되었다. Embryogenic callus 유기에 가장 효과적인 배지조성은 MS조성에 2,4-D 1.0 mg/ℓ첨가한 것이었다. 유기된 embryogenic callus로부터 균일하고 정상적인 체세포배를 대량생산하는 방법은, 물리적인 방법으로는 embryogenic callus를 40과 60 mesh에 차례로 통과시키는 2단계 분리법을 사용하고, 화학적으로는 액체배지에 ABA 0.05 mg/ℓ+ PEG 10% + BA 1.0 mg/ℓ를 체세포배의 각 발달단계 마다 적절하게 공급하는 방법이 있다. 체세포배는 MS배지가 첨가된 urethane sponge 위에서 발아가 잘 되었으며, 환기가 잘 되는 조건에서 발아율이 증가하였다. 또 체세포배는 0℃에서 10일간 저장하면 저장하지 않은 것에 비하여 발아율이 증가하였다. 발아에 가장 효과적인 체세포배의 크기는 1.0cm였고, 발아초기에는 850 lux정도의 저광도가 적절하였으나 순화에는 27,000 lux의 강광이 요구되었다. 미나리 실생묘를 노지에 정식할 때 이앙기를 이용하기 위해서는 모판에 부� |
